eLife :毛志勇/高绍荣合作团队建立高通量药物筛选平台更高CRISPR基因靶向整合效率

2021-12-27 00:02:35 来源:
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CRISPR-Cas9酪氨酸的突变金丝技术开发自问世以来之前因其广阔的技术开发的发展前景越来越有了众多关注。然而,CRISPR-Cas9子;也统的金丝经济性问题阻碍了其越来越进一步的也就是说技术开发的发展。当Cas9在突变组特为定肽链诱发DNA双链断裂后,其修整方式的选择不得不了就此的金丝产物:只有成功顺利进行词源分拆(HR)才可顺利进行其会突变的金丝,而频发非词源顶端连结(NHEJ)则会引来突变敲除。因此,领域内显然:如果可以人为隐身Cas9切割DNA后的双链断裂修整选择偏向,理论上就可以改变突变抗病毒紧密结合的经济性。

eLife 周报在线发表了同济大学自建第一妇婴保健院、信息科学与技术开发艺术学院毛志勇与高绍荣教授课题组合作的题为A high-throughput small molecule screen identifies farrerol as a potentiator of CRISPR/Cas9-mediated genome editing 的撰文。这项岗位之中,的团队成员在毛志勇课题组前期创设的双色发射光谱DNA双链断裂修整报告细胞株之中(Nucleic Acids Research, 2019)紧密结合了可由多西环伦抑止内切酶I-SceI表达的表征。运用这一新型子;也统,可解决问题简单短时间内地通过多西环伦抑止突变组特为定肽链频发双链断裂,并基于流式细胞技术开发分析方法细胞发射光谱,从而假定人体内的DNA双链断裂修整情况。

研究岗位的团队运用该高通量配对跨平台,鉴定造出了催化反应有机化合物——凤尾伦(farrerol)可显着有利于HR修整,并对NHEJ修整经济性无显着直接影响。基于此,研究岗位的团队不得不尝试运用凤尾伦增加CRISPR-Cas9酪氨酸的突变抗病毒紧密结合经济性。实验相比之下:凤尾伦在人和大鼠细胞之中的多个突变组肽链尽可能解决问题越来越有效准确地抗病毒紧密结合。此外,凤尾伦在大鼠卵子水平也尽可能有效有利于抗病毒紧密结合经济性,随后得不到的抗病毒紧密结合大鼠也具备生殖细胞;也传递信息的能力。

该合作研究岗位的团队创设的新型高通量配对子;也统具备以下几项优势:(1)DNA双链断裂修整受基因表达直接影响前所未有,而转染本身会对基因表达遭受一定直接影响。由于该子;也统只需要自组多西环伦即可诱发双链断裂,而不需要任何其会突变的转染,因此避免了由转染对DNA修整遭受的潜在扰乱;(2)本子;也统可配合流式细胞技术开发或高内涵配对子;也统顺利进行高效合理的定量分析方法;(3)配对得不到的直接影响DNA双链断裂修整的有机化合物不仅可使用隐身Cas9金丝经济性,还具备其他多项潜在技术开发的发展价值。如可运用消除DNA修整的催化反应药品抗病毒胃癌或与其他方法顺利进行联合抗病毒治疗,以及运用有利于DNA修整的催化反应药品改善突变组准确性以延缓衰老的频发。

毛志勇与高绍荣教授课题组的该研究岗位成果,将大大增加CRISPR-Cas9酪氨酸的突变抗病毒紧密结合经济性。此外,该岗位见到凤尾伦通过有利于分拆酶RAD51的短时间内招募,进而增加HR修整之中的较为准确的亚通路——突变转换(gene conversion)或者绑定(crossover)——的经济性,而对可能遭受重复序列分拆的单链退火(single strand annealing)通路有显着消除作用;该催化反应有机化合物对相同细胞的突变组准确性、核型及演化过程都没有显着的直接影响,而目前被国际上使用的有利于CRISPR-Cas9酪氨酸的突变抗病毒紧密结合的催化反应SCR7及RS-1均表现造出了相同相对的突变或卵子致癌性。该岗位的研究岗位结果提示:凤尾伦既可以通过增加HR修整经济性有利于相同物种、相同肽链的抗病毒紧密结合经济性,又具备较低的细胞和卵子致癌性,预示其具备关键性的升华技术开发的发展潜能。

越来越早造应是:

Weina Zhang, Yu Chen, Jiaqing Yang, et al.A high-throughput small molecule screen identifies farrerol as a potentiator of CRISPR/Cas9-mediated genome editing.Elife. 2020 Jul 9;9:e56008. doi: 10.7554/eLife.56008.

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